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产品货号：
WE0115
中文名称：
UNG酶
英文名称：
Uracil-N-Glycosylase
产品规格：
200U|1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是通过大肠杆菌表达纯化的重组UNG酶，蛋白分子量为25kD，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，并且对RNA无活性，主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为：在PCR反应中以dUTP代替dTTP，扩增产物片段中的T全部被U取代，形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解反应体系中含U的DNA，有效消除PCR产物的残留污染，大大降低扩增产物污染导致的假阳性，从而保证扩增的特异性和准确性。
| 组分 | 200U | 1000U |
| Uracil-N-Glycosylase(1U/μL) | 200μL | 1mL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃
37℃，60分钟内催化1nmol尿嘧啶，从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
SDS-PAGE检测纯度大于95%；经检测无核酸内、外切酶活性。
- UNG长期储存(非频繁使用;每月少于3次)请置于-70℃保存，每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融，大包装建议分装使用。
- UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子，一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一，使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测，T-DNA仍会积累，此抗污染系统也难以起到完全的作用。
- UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施，为了防止PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时，必须严格规范实验室的划分和操作。
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法，实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
- 配制PCR反应体系(以50μL体系为例)
成分 用量 终浓度 10×Taq PCR Buffer 5μL 1× 10mM dATP 1μL 200μM 10mM dGTP 1μL 200μM 10mM dCTP 1μL 200μM 10mM dTTP 0.5μL 100μM 10mM dUTP 1μL 200μM Forward Primer(10μM) 1μL 0.2μM Reverse Primer(10μM) 1μL 0.2μM Template DNA X μL - Taq DNA Polymerase(5U/μL) 0.5μL 2.5U/50μL Uracil-N-Glycosylase(1U/μL) 0.2μL 0.2U/50μL ddH2O 至50μL - - 设置反应程序
步骤 温度 时间 循环数 UNG消化 37℃～50℃ 5～10min 1 预变性 95℃ 10min 1 变性 94℃ 30 s 30-40 退火 55～65℃ 30 s 延伸 72℃ 1kb/min 终延伸 72℃ 5min 1
注意：通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中，先于37℃～50℃范围内消化5～10分钟，然后95℃ 10分钟灭活，（同时这一步也达到预变性和热启动的效果），随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃～50℃，5～10分钟的范围内变化，可以根据实验的需要进行调整。
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